عامل زواج الاقارب و دوره الرئیسی فی ارتفاع الامراض الوراثیة لنتزوج بوعی لیکن لدینا جیل سالم.

MLPA : MLPA

MLPA

Multiplex Ligation-dependent prob amplification

تطور مدهش فی تحدید الادق و السریع للامراض الوراثیة

اسلوب ال MLPA احدث و افعل اسالیب الجزیئیة لتحدید السریع و الادق لتعداد النسخ (الجرعة) الوراثیة (deletion duplication) و ایضا  تحدید الطفرات النقطیة فی عدد کبیر من الامراض الوراثیة للانسان. هذا الاسلوب من التحدید قادر علی اختبار الکمی ل ال DNA و دراسة عدد النسخ الجینیة gene dosage فی 50 حتی 60 نقاط مختلفة و فی رد فعل بسیط ل ال PCR.

فی هذا الاسلوب من الاختبار و بتخطیط مجموعة من المسابیر و الذی کل واحد منهما یکمل نقطة محددة من الجین من الممکن نقدر ان نحدد عدد النسخ الجینیة (delition duplication)  فی منطقة خاصة. اساس العمل یترکز علی تهجین کل زوج من المسابیر مع تسلسل محدد فی الجین و بشکل خاص. بحیث ان یمکن معرفة التغییر الحاصل لالنیکلیوتید فی محل اتصال مسبارین و یمکن ان یستفاد من هذه المیزة لتخطیط المسابیر الخاصة لدراسة طفرات النقطیة المحددة. من فوائد اسلوب ال MLPA هو انه یمکن تحدید عدد النسخ الوراثیة deletion duplication باسرع وقت مایکون و مع نقطة مکانیة غیر معینة. اما فی اسلوبReal Time  لابد ان یحدد محل الخبن(الازالات) او التضاعفات.

مراحل انجاز ال MLPA

تطبیق اسلوب ال MLPA

دراسة ال  delition/duplication فی جین خاصة اذا کان:

 delition/duplication کبیر مع نقطة غیر معینة

Delition/duplication یحتوی علی الایکسونات المتعددة کدراسة جین الدیستروفین عند اشخاص المشتبه باصابتهم بمرض ضمور العضلات الدوشین و البیکر( بهذا الاسلوب من الاختبار اضافة الی تحدید المصابین یمکن ان یحدد ناقلی جین المصابین)

دراسة عدد نسخ الجینیة عند نقطة معینة لکروموسومات المختلفة ل screening الجینات المتنوعة.

دراسة طفرات النقطیة و متعددة الاشکال(SNPs) المعروفة و المعینة.

دراسة الکمیة ل ال mRNA

دراسة وضع المثیلة لمناطق محضضة او مطبوعة imprinted

دراسة DNA المستخلصة من نسیج ال (formalin treated paraffin imbedded) 

مقارنة اسلوب ال MLPA مع باقی الاسالیب:

  • اسالیب کتعیین التسلسل SSCP ,DHPLC و ...  تستخدم لتحدید طفرات النقطیة القادرة علی معرفة التغیرات العددیة ل النسخة الوراثیة فی منطقة وسیعة و لم تصل الی ایکسون کامل.
  • اسلوب ال FISH لم یقدر علی تحدید الطفرات الصغیرة

Southern blots  القادر بمعرفة الازالات (الخبن) الی کم الف من زوج القواعد bp)1000( اما:

یلزم الی مقدار الکثیر من ال DNA الی حد ما و بالجودة العالیة.

یلزم استعمال  مشع (اشعاعی) المسابیر.

  • یستغرق وقت کثیر و قد یکون صعب و ایضا ذو کلفة عالیة.

Real Time PCR  ذو حساسیة منخفظة فی عدد النسخ الجینیة و لیس اسلوب یقدر علی التکاثر فی زمن الواحد و نطاق العمل لدیه محدودة.

من فوائد استعمال اسلوب ال MLPA:

  • امکان دراسة متزامنة 40 حتی 50 محل مختلف جینی عند ردود فعل ل ال .PCR
  • الحاجة الی مقدار قلیل من ال .DNA
  • لانجاز هذا الاختبار یلزم جهاز ترموسایکلر و جهاز رحلان کهربی Capillary اذا لم یکن هناک جهاز الکتروفورز او رحلان کهربی Capillary  قد یحتفظ محصول النهایی ل ال PCR  فی درجة الحرارة 4+ و عند اذن یرسل الی مراکز اخری.
  • تزداد سرعة النتیجة مع لحوظ  مستوی استعلامات و اطلاعات الحاصلة. بحیث ان یمکن انجاز کل مراحل التفسیر و القراءة خلال 24 ساعة. تکون کلفة کل رد فعل مع لحوظ مستوی استعلامات الحاصلة مناسبة.
  • هذا الاسلوب من الاختبار ذو قدرة و دقة ((robustness عالیة. لان قد یستفاد من مشرع زوج واحد لانجاز التکاثر فحسب و مشاهدة الاشارات فی المنطقة الناتجة من تهجین اثنین من المسبارین المستقلة مع خصائص عالیة و فی حد نیکلیوتید واحد.
  • اسلوب العمل قد یکون متساو لتطبیقات و استعمالات متنوعة.
  • کل الحالات اللازمة لهذا الاسلوب قد تکون فی طقم واحد.

استعمال المتزاید

نظرا الی فوائد هذا الاسلوب قد یزداد استعمال دراسة الجزیئیة للامراض المختلفة. حالیا یستخدم اسلوب ال MLPA فی مجال معرفة الناقلین و تحدید المصابین بالامراض الوراثیة المختلفة خاصة الامراض الناجمة من طفرات الازالات (الخبن) الکبیرة و مع نقطة محددة جینیة متنوعة مثل الثالاسیمیا ال الفا و البیتا و ضمور العظلات الدوشین و البیکر. الیوم اکثر من 300 طقم مختلف یکون لتحدید الامراض المتنوعة و بهدف الدراسة عند الفئات الواردة التی تکون قائمتها فی موقع www.mrc-holland.com . ایضا و بحسب الحاجة و ترتیب الزبائن یمکن تخطیط المسابیر لمناطق جینیة اخری.

1-prenatal & postnatal

2-neurogenetics & mental retardation

3-hereditary cancer

4-tumour characteisation

5-methylation analysis

6-pharmacogenetics

7-various genetic disorders

8-mRNA analysis

 استخدام اسلوب ال MLPA فی تحدید الناقلی و تحدید قبل الولادة لانواع الامراض فی هذا المختبر:

  1. DMD
  2. Spinal Muscular Dystrophy
  3. Alpha Thalassemia
  4. Beta Thalassemia
  5. Mental Retardation

  1. Prader-Willi/Angelman

  1. CFTR
  2. Hemophilia
  3. Cancer
  1. PKU
  2. Deafness
  3. aneuploidy
  4. Others